Вируса иммунодефицита человека (ВИЧ ГЕН КАЧЕСТВЕННЫЙ)
- Набор реагентов ВИЧ–ГЕН для выявления нуклеиновых кислот (НК) вируса иммунодефицита человека (ВИЧ)
138-13_hiv_kach_ivd_b_2018-09-19
Набор реагентов ВИЧ–ГЕН для выявления нуклеиновых кислот (НК) вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) предназначен для определения РНК ВИЧ 1-го типа в образцах плазмы крови методом обратной транскрипции и
полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени.
Набор реагентов ВИЧ–ГЕН может быть использован в клинической практике для диагностики ВИЧ 1-го типа.
ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
Принцип действия
Принцип метода основан на использовании процесса обратной транскрипции РНК и последующей амплификации кДНК,
заключающейся в повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей достройки полинуклеотидных цепей с этих праймеров Taq-полимеразой.
Для повышения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено применение «горячего» старта, который обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоёв, разделённых прослойкой из парафина. Смешение слоёв и превращение их в амплификационную смесь происходит только после плавления парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки.
В реакционную смесь для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых содержит флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. При образовании специфичного продукта ДНК-зонд разрушается, действие гасителя на флуоресцентную метку прекращается, что ведёт к возрастанию
уровня флуоресценции. Количество разрушенных зондов (а, следовательно, и уровень флуоресценции) увеличивается пропорционально количеству образовавшихся специфических ампликонов и измеряется на каждом цикле амплификации.
Исследование с использованием набора реагентов ВИЧ-ГЕН состоит из следующих этапов: выделение РНК (пробоподготовка), реакция обратной транскрипции, ПЦР-амплификация к ДНК ВИЧ-1 в режиме реального времени. На стадии выделения РНК в реакционную смесь добавляют внутренний контрольный образец (РНК-ВК), предназначенный для оценки эффективности всех этапов исследования.
В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продукта амплификации искомой кДНК, включена флуоресцентная метка Fam. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продукта амплификации внутреннего контрольного образца (РНК-ВК), входит флуоресцентный краситель Hex
Набор рассчитан на проведение 96/100 определений, включая анализ неизвестных образцов, положительных контрольных образцов и отрицательных контрольных образцов.
